介质原理→关键性能→评估→哪些评价的控制策略→收集数据评价→结果→结论

构建特性→下游纯化工艺

裂解为有菌区，后续粗纯为无活菌区（工程菌）

验证策略控制与工艺设计相关

属性：分子筛？官能团？

产品工艺和工艺功能

功能原理结合蛋白性质来写

大分子分子筛效应不明显，扩散弱

柱效：均一性、松紧：对称性，N代表分离能力

分子筛

全排阻，N不重要，对成型重要，类似与化工类的蒸馏塔

脱盐、除色素

非全排阻（进孔）

路径不一样

反压大→碎胶多→装柱效果差→筛胶

日常维护（装填、封存）

清洁（前后处理、CIP）

# 来源类型

天然

表达

# 踏板

引用化工蒸馏的概念

# 装柱工艺

# 柱效测定

小分子扩散探测评价介质分布情况

图谱（吸附类的）：产品来评价吸附，官能团多少直接影响吸附能力和分离能力

柱效

定期测柱效的标准

合格限

行动限

警戒限

中间柱效变化由图谱体现，如果中间某次图谱异常，怎么办？监测下样液合格即可放行？

上样液可以过滤，减少柱子的压力，延长层析柱的使用寿命

柱头膜堵塞

反向冲洗、超声波冲洗，目视看不出来

柱壳问题，正向上样不行，可以尝试反向上样

缓冲液中，EDTA（金属螯合剂，抢夺酶的金属离子）抑制酶的作用

# 工艺参数

柱桶规格

柱高

柱内直径

径高比

上样载量（体积）：上样体积大，滞留时间长

上样浓度：浓度高，热扩散明显，蛋白的溶解上限

样品状态：粘度、颗粒物

基线：规定基线范围

柱效要求

线性流速：流速高，介质耐受问题；流速低，滞留时间长，分离度差

缓冲体系

柱温（以流出液温度为准）和环境温度

# 洗脱

分离度：连续梯度洗脱优于恒定洗脱

恒定洗脱

连续梯度洗脱

手工较难实现，一般通过设备实现

# 图谱

根据图谱可以反推柱子和样品的状态