非全排阻

大分子难进，难深入

除二聚体、四聚体

比全排阻更注重介质完整性


> S-100

> 2021年6月24日 21:49

- 盐析（去除硫酸铵、Tris，缩小体积，将缓冲体系更换为PB）
- 盐析

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> 目的：使蛋白沉淀出来温度：？

> 硫酸铵用量：3.5mol/L硫酸铵溶液→硫酸铵终浓度：1.35mol/L～1.83mol/L
> 时长：10min

- 一次离心

  - 目的：使蛋白沉淀与杂质溶液分离

    □ 温度：4℃

    □ 离心力：9910g

    - 时长：30min
    - 留存：蛋白沉淀
  - 蛋白溶解

    - 目的：使蛋白沉淀溶解
    - 溶解液：5m mol/L PB pH 7.2±0.1
    - 蛋白浓度：35mg/ml\~50mg/ml
  - 二次离心

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- S-100

  - 目的

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> 目的：使目的蛋白溶液与杂质蛋白沉淀分离

> 温度：4℃

> 离心力：9910g 时 长 ：15min 留存：上清液

> 除去高分子蛋白质

- 层析原理

  - 分子筛，非全排阻，每米理论塔板数很重要
  - 层析柱型号

    柱内直径（cm）

    柱高度（cm）

    柱床体积（L）

    柱床高度（cm）

    上样量

    蛋白处理范围

    BPG 200/950

    20

    95

    25.0±0.5

    80±5

    ≤6%柱床体积

    ≤1.47L

> ○

- 填料信息

  - 名称：Sephacryl S100 H.R

    - 排阻范围：1\~100KD
    - 更换时间
  - 柱效要求

    - 每米理论塔板数：≥4000

      □ 对称性：0.8\~1.2
- 缓冲液

  - 平衡缓冲液、洗脱缓冲液
- 0.05mol/L NaCl-5m mol/L PB
- 步骤

  - 平衡

    - 上样
    - 洗脱
    - 收集
- Q&A

  - S-100浓度多少开始收集，浓度多少可以结束，除了浓度收集法，还有什么收集方法？
  - SOP中规定，S-100工序后处理后需要用WFI冲至中性，但因生产计划3天1批导致没有时间冲到中性，然后继续下一批生
    产，是否合规