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柱效(反应柱子装填效果,柱效不行的时候就该考虑重新装柱了!!!)
- 柱效组成和评判标准
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理论塔板数(N)
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跟装柱高度有关,柱高越高,理论塔板数越高
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N=5.54(Ve/Wh)2
◊ Ve:洗脱体积,峰尖对应的体积
◊ Wh:半峰高的宽度
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每米理论踏板数(Nh)
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Nh=N/L
◊ N:理论塔板数
◊ L:柱床高度,cm
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理论塔板高度(HETP)
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跟填料颗粒大小有关,大颗粒的理论塔板高度大,一般在3~5倍颗粒直径比较好
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HETP=L/N
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不对称因子(As)
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1/10峰高左右两边宽度的比值,0.8~1.2最好
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As=1:峰最好的形状
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As>1:峰拖尾,
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As<1:峰前倾,
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图片
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测柱效方法
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走样品
□ 流速:15~30cm/h
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1%丙酮(紫外280nm检测)或2M NaCl(电导检测)
□ 上样体积:0.5%~2%
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柱效测定常见的问题、原因和措施
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问题 | 原因 | 措施 |
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峰前倾 | 柱床过紧 | 重装柱子或降低装柱流速 |
峰拖尾 | 柱床过松 | 重装柱子或增加装柱流速 |
双峰,主峰前有“额外峰”,柱床上裂缝 | 泵脉动,产生空气 柱床过紧 | 使用其他类型的泵或增加空气陷阱 重装柱子或降低装柱流速 |
双峰,主峰后有“额外峰”,柱床上或介质与入口之间有裂缝 | 柱床过松 | 重装柱子或调整柱头,增加装柱流速 |
不对成因素增加(拖尾增加,前伸减少) | 柱床过松,介质与入口有空气 柱子没有适当平衡 | 重装柱子或增加装柱流速 重新平衡柱子,重新测试 |
不对成因素增加(前伸增加,拖尾减少) | 柱床过紧,有裂缝且越加严重柱子没有适当平衡 | 重装柱子或降低装柱流速重新平衡柱子,重新测试 |
板数量减少 | 柱床过紧或过松 | 重新装柱 |