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非全排阻
大分子难进，难深入
除二聚体、四聚体
比全排阻更注重介质完整性
S-100
2021年6月24日 21:49
- 盐析（去除硫酸铵、Tris，缩小体积，将缓冲体系更换为PB）
- 盐析
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□
□
目的：使蛋白沉淀出来温度：？
硫酸铵用量：3.5mol/L硫酸铵溶液→硫酸铵终浓度：1.35mol/L～1.83mol/L 时长：10min
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一次离心
-
目的：使蛋白沉淀与杂质溶液分离
□ 温度：4℃
□ 离心力：9910g
- 时长：30min
- 留存：蛋白沉淀
-
蛋白溶解
- 目的：使蛋白沉淀溶解
- 溶解液：5m mol/L PB pH 7.2±0.1
- 蛋白浓度：35mg/ml~50mg/ml
-
二次离心
-
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□
□
□
□
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S-100
- 目的
□
目的：使目的蛋白溶液与杂质蛋白沉淀分离
温度：4℃
离心力：9910g 时 长 ：15min 留存：上清液
除去高分子蛋白质
-
层析原理
-
分子筛，非全排阻，每米理论塔板数很重要
-
层析柱型号
柱内直径（cm）
柱高度（cm）
柱床体积（L）
柱床高度（cm）
上样量
蛋白处理范围
BPG 200/950
20
95
25.0±0.5
80±5
≤6%柱床体积
≤1.47L
-
○
-
填料信息
-
名称：Sephacryl S100 H.R
- 排阻范围：1~100KD
- 更换时间
-
柱效要求
-
每米理论塔板数：≥4000
□ 对称性：0.8~1.2
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缓冲液
- 平衡缓冲液、洗脱缓冲液
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0.05mol/L NaCl-5m mol/L PB
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步骤
-
平衡
- 上样
- 洗脱
- 收集
-
-
Q&A
- S-100浓度多少开始收集，浓度多少可以结束，除了浓度收集法，还有什么收集方法？
- SOP中规定，S-100工序后处理后需要用WFI冲至中性，但因生产计划3天1批导致没有时间冲到中性，然后继续下一批生 产，是否合规