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非全排阻
大分子难进,难深入
除二聚体、四聚体
比全排阻更注重介质完整性
> S-100
> 2021年6月24日 21:49
- 盐析去除硫酸铵、Tris缩小体积将缓冲体系更换为PB
- 盐析
> 目的:使蛋白沉淀出来温度:?
> 硫酸铵用量3.5mol/L硫酸铵溶液→硫酸铵终浓度1.35mol/L1.83mol/L
> 时长10min
- 一次离心
- 目的:使蛋白沉淀与杂质溶液分离
□ 温度4℃
□ 离心力9910g
- 时长30min
- 留存:蛋白沉淀
- 蛋白溶解
- 目的:使蛋白沉淀溶解
- 溶解液5m mol/L PB pH 7.2±0.1
- 蛋白浓度35mg/ml\~50mg/ml
- 二次离心
- S-100
- 目的
> 目的:使目的蛋白溶液与杂质蛋白沉淀分离
> 温度4℃
> 离心力9910g 时 长 15min 留存:上清液
> 除去高分子蛋白质
- 层析原理
- 分子筛,非全排阻,每米理论塔板数很重要
- 层析柱型号
柱内直径cm
柱高度cm
柱床体积L
柱床高度cm
上样量
蛋白处理范围
BPG 200/950
20
95
25.0±0.5
80±5
≤6%柱床体积
≤1.47L
>
- 填料信息
- 名称Sephacryl S100 H.R
- 排阻范围1\~100KD
- 更换时间
- 柱效要求
- 每米理论塔板数≥4000
□ 对称性0.8\~1.2
- 缓冲液
- 平衡缓冲液、洗脱缓冲液
- 0.05mol/L NaCl-5m mol/L PB
- 步骤
- 平衡
- 上样
- 洗脱
- 收集
- Q&A
- S-100浓度多少开始收集浓度多少可以结束除了浓度收集法还有什么收集方法
- SOP中规定S-100工序后处理后需要用WFI冲至中性但因生产计划3天1批导致没有时间冲到中性然后继续下一批生
产,是否合规