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非全排阻
大分子难进,难深入
除二聚体、四聚体
比全排阻更注重介质完整性
> S-100
> 2021年6月24日 21:49
- 盐析( 去除硫酸铵、Tris, 缩小体积, 将缓冲体系更换为PB)
- 盐析
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> 目的:使蛋白沉淀出来温度:?
> 硫酸铵用量: 3.5mol/L硫酸铵溶液→硫酸铵终浓度: 1.35mol/L~ 1.83mol/L
> 时长: 10min
- 一次离心
- 目的:使蛋白沉淀与杂质溶液分离
□ 温度: 4℃
□ 离心力: 9910g
- 时长: 30min
- 留存:蛋白沉淀
- 蛋白溶解
- 目的:使蛋白沉淀溶解
- 溶解液: 5m mol/L PB pH 7.2±0.1
- 蛋白浓度: 35mg/ml\~50mg/ml
- 二次离心
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- S-100
- 目的
□
> 目的:使目的蛋白溶液与杂质蛋白沉淀分离
> 温度: 4℃
> 离心力: 9910g 时 长 : 15min 留存:上清液
> 除去高分子蛋白质
- 层析原理
- 分子筛,非全排阻,每米理论塔板数很重要
- 层析柱型号
柱内直径( cm)
柱高度( cm)
柱床体积( L)
柱床高度( cm)
上样量
蛋白处理范围
BPG 200/950
20
95
25.0±0.5
80±5
≤6%柱床体积
≤1.47L
> ○
- 填料信息
- 名称: Sephacryl S100 H.R
- 排阻范围: 1\~100KD
- 更换时间
- 柱效要求
- 每米理论塔板数: ≥4000
□ 对称性: 0.8\~1.2
- 缓冲液
- 平衡缓冲液、洗脱缓冲液
- 0.05mol/L NaCl-5m mol/L PB
- 步骤
- 平衡
- 上样
- 洗脱
- 收集
- Q& A
- S-100浓度多少开始收集, 浓度多少可以结束, 除了浓度收集法, 还有什么收集方法?
- SOP中规定, S-100工序后处理后需要用WFI冲至中性, 但因生产计划3天1批导致没有时间冲到中性, 然后继续下一批生
产,是否合规